Question biologie 3 - Les utilisations de la GFP

Le prix Nobel de Chimie 2008 a été décerné à 3 américains pour la découverte de la GFP, la Green Fluorescent Protein.

http://nobelprize.org/nobel_prizes/chemistry/laureates/2008/

Alors, alors... dites moi tout...

Quelles sont les utilisations de la GFP en biologie ?

J'en connais 2... peut être y en a-t-il plus...

Bon courage !

coucou

alors elle est issue d'une méduse Aequorea victoria

euh vu son nom au marquage? on introduit le gène dans un embryon par exemple et on suit ensuite la fluorescence par microscope à fluroescence

Eh oh, là, je vais te dire comme à les élèves : "oui mais encore ? Tu peux préciser et m'en dire plus ?" (je fais la membre du jury, je pense pas qu'ils seraient pas contents que tu répondent ça !!!)

Je veux du scientifique, pas de l'à peu près intuitif...

lol oui c'est ce que j'étais en train de faire en fait!lol

je continue mes recherches!

elle peut êtres utilisé en fait pour les marquages (suivi de protéines... )chez les animaux mais aussi chez les végétaux 'étude des mycorhizes j'ai vu) mais aussi pour l'étude de la propagation des cancers.

mais je trouve pas grand chose d'autres

La GFP peut-etre utilisé comme gène rapporteur. il est inséré par transgenèse en aval d'une séquence régulatrice dont on veut étudier le profil
il peut aussi servir de marqueur de transfection, afin de vérifier que la construction est bien "entrée" dans les cellules

Ce sont les 2 utilisations que j'en faisais en labo en tous cas lol

Il n'y a pas que 2 applications pour la GFP mais une multitudes de déclinaisons autours de la fluorescence (Western Blot, quantification de l'expression génique, étude des régulators, cytogénétique, suivi de trafic intracellulaire...)

De nombreuses autres protéines fluo ont été développées, en particulier par le labo de Roger Tsien, à partir de la DsRed qui a comme important avantage d'être monomérique.

D'autres techniques existent, en particulier autours de la luciférase.

Vu l'actualité, il est en effet peut-être utile de se faire une petite review là dessus

On continue... ? OK pour le marquage, gène rapporteur... Qui me fait un petit speech là dessus, pas grand chose, expliquer le principe pour tous (si il faut, je m'y colle... ) ?

Ma seconde application est toute bête (ben moi, on me l'a appris donc forcément je la trouve toute bête...) et vous servira peut être dans pas mal de devoirs et leçons...
Petit indice... ? Ok c'est bien parceque c'est vous... ===> Ca²⁺

A demain !

c'est rapport aux neurones ?

Parce que si c'est cela c'est "juste" une construction de BM de plus. Enfin, c'est super bien joué évidemment, mais ça rentre dans la case "gène rapporteur et trafic cellulaire"

Sinon, je vois pas

Eh non, perdu !!!

Je donnerai un autre indice tout à l'heure (ben vi, j'allas mettre demain, mais on y est...) si vous ne trouvez pas...

Ah tu le prends comme ça

Bon, et bien c'est parti, j'ai déjà trouvé plein de choses sur le tag GFP et son interraction avec le Ca2+

C'est bon, c'est le FRET, purée je suis vraiment en dessous de tout

Allez, un petit shéma vaut mieux qu'un long discours.

Il s'agit de la construction "historique" pour détecter le Ca2+.

Maintenant il existe moult construction de toutes les couleurs pour détecter plein de molécules (désolé pour la précision...)

Cliquez sur l'image pour le full-text



Je dis pas où j'ai piqué ce truc (mais c'est fiable !), d'ailleurs je suis pas sûr que les auteurs aient eu même les droits sur l'article de Nature duquel c'est inspiré...

Si je me souviens bien, on peut insérer le gène de la GFP pour vérifier qu'une transgénèse est réussie.
Le principe: on prend le gène qu'on veut transférer, on lui colle le gène codant la GFP; on insère le tout dans le plasmide d'une bactérie capable d'infecter l'organisme receveur: par exemple, pour infecter des plants de tabac, on se sert d'Agrobacterium tumefaciens (bactérie Gram - pathogène , ce qui permet la transfection de la plupart des plantes) ou Agrobactérium rhyzogenes (moins virulent, mais ça fera juste des racines en plus au lieu de tumeurs, c'est light comme infection).
Une fois dans l'organisme, la bactérie injecte un morceau de son plasmide (plasmide Ti) pour les coloniser. Chaque plasmide a sa propre région de réplication, le génôme de la plante continent des gènes nécessaires à l'attachement du T-DNA dans son génome (chromosomal virulance, le génie génétique, c'est souvent en anglais).
Revenons au sujet:
donc, on accroche le gène codant GFP à la suite du gène d'intérêt qu'on veut transférer au génôme de l'organisme receveur. Si l'organisme receveur, quand il se développe, exprime le gène de la GFP (et ça c'est facile à voir: c'est s'il est fluo), c'est que, très probablement, le gène d'intérêt a bien lui aussi été transféré dans le génôme receveur: on a réussi sa transgénèse et on a l'OGM qu'on voulait.
Donc le GFP sert de marqueur de la transgénèse.

Je me demande si ça n'a pas aussi un usage avec des anticorps.

Julie, ok avec ton explication.

David, ton schéma serait pas un peu théorique par le plus grand des zazards ? Tu es sur la bonne voie, mais à quoi est-ce que ça peut bien servir par ex ?

et bien ca peut servir partout ou intervient le calcium!lol
non je sais pas, et je comprend pas trop le shéma de david en fait

Bérénice (aqui vient de se déboiter l'épaule en tapant à l'ordi...)

Même avec la légende explicative tu comprends pas ??

Bon en gros, le principe est de construire une protéine de fusion conprenant 2 domaines fluo A et B, reliés par un polypeptide ayant (1) une affinité pour la molécule qu'on veut détecter intra cellulo et (2) la propriété de se "contracter" lorsque la molécule d'intérêt vient se fixer. Il y a alors rapprochement des deux domaines fluo. À ce moment, la fluorescence émise par la première "prot" fluo va servir à exiter la seconde. Comme on aura pris soin de choisir des prot qui n'ont pas la même couleur d'émission, paf, quand le substrat se fixe ça change de couleur.

C'est un peu résumé... et en plus c'est pas mieux dit que la légende du shéma

David j'arrive pas à avoir la légende du shéma en fait... hiii ca me l'ouvre pas!
les mystères de l'informatique

C'est ici :
http://pagesperso-orange.fr/Davidus/shema_fret.jpg

copier/coller dans ton navigateur et ça devrait marcher

ah ben oui ca marche comme ca!
merci

Je crois savoir : on s'en sert pour mettre en évidence la reconnaissance cellulaire. J'avais vu ça en DEUG (oouuuh c'est loin...). On marque des cellules de spongiaires de deux individus différents. On procède à un broyage des éponges puis on laisse les cellules migrer les unes vers les autres. On remarque que les cellules se regroupent selon les éponges de départ (grâce à deux marquages de couleurs différentes). UIl y a eu reconnaissance cellulaire

C'est un peu brouillon mais ça vient direct de mes souvenirs ....
Céline

Ah bah ça peut être, je connais pas...

Allez, un autre indice... Donc on avait indice n°1 = Calcium, j'ajoute indice n°2 = localisation... Là, vous avez tout... !

coucou

au final tout ce qu'on a dit depuis le début c'est la même chose --> marquage de cellule de quelque chose en fait pour le voir...

localiser le calcium..? au niveau des neurones? muscles?

Ah non, pas du tout, ce n'est pas du tout le même principe que le marquage des protéines avec le génie génétique...

Je fais un topo dans la soirée ou demain...

ben on a parlé que de marquage par génie génétique pour le moment...
NON? j'ai loupé un truc..